大健康学院65个蜂糖李样品转录组测序及小RNA组测序联合分析测序项目采购公告

序号

名称

型号

数量

单位

技术参数

1

转录组测序及小RNA组测序联合分析

无

65

个

技术原理要求：转录组测序 (RNA-seq)：基于高通量测序平台（如Illumina），将样本中的总RNA（通常是mRNA或通过去除rRNA得到的全转录本）片段化并反转录为cDNA，进行大规模平行测序。通过比对到参考基因组，可以定量基因表达水平（如FPKM/TPM），发现新转录本、可变剪接等。小RNA组测序 (small RNA-seq)：专门针对长度在18-30 nt之间的小非编码RNA（如miRNA、siRNA、piRNA等）。由于片段极短，需要通过在3'端和5'端分别连接特异性测序接头，再进行反转录、PCR扩增和测序，从而专门捕获并分析小RNA的种类和表达量。

实验流程要求：1、RNA 质检并出具质检报告（电泳图/Agilent 2100 图谱、浓度、RIN），提取高质量总RNA，要求RNA完整值（RIN）通常≥7.0或8.0，无明显降解，且需将同一份总RNA分成两等份，分别用于转录组和小RNA组的文库构建；2、转录组建库：总RNA经 Oligo(dT) 富集或 rRNA 去除后，进行片段化，合成双链cDNA，末端修复加A、加测序接头，最后PCR扩增。小RNA组建库：从总RNA中分离18-30 nt的小RNA片段，依次进行3'端和5'端接头连接，反转录为cDNA，再进行PCR扩增；3、测序要求：

通常采用Illumina平台。转录组一般进行双端150bp（PE150）测序，数据量通常要求6-10G clean data/样本；小RNA组一般进行单端50bp（SE50）测序，数据量通常要求10-20M reads/样本。

交付结果：基础数据质控：原始测序数据（Raw Reads）、过滤后的高质量数据（Clean Reads）；转录组分析：测序数据与参考基因组的比对率统计、基因/转录本的表达定量矩阵、差异表达基因（DEG）筛选、火山图、聚类热图。GO功能注释、KEGG通路富集分析等。小RNA组结果：小RNA长度分布统计及分类注释。已知miRNA的鉴定及新miRNA的预测。差异表达小RNA筛选及表达聚类。联合分析结果：

靶基因预测、mRNA-miRNA关联分析、联合功能富集、调控网络可视化